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技术服务科学家回答诸如“哪种产品适合我?”“这个产品是如何工作的?”事情错了!”

作为一名学生,我浪费了太多的时间去思考哪种分析方法最有效,还是自己摸索解决问题。我希望我知道我可以向另一个知识渊博的科学家寻求帮助:一个技术服务科学家!

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哦,你可以“glo”的方式

在Promega,我们通过利用生物发光检测方法的灵敏度和宽动态范围帮助您的实验“GLO”为30年。然而,我们发现许多科学家仍然更熟悉比色或荧光测定检测等较旧的技术而不是发光。本周年纪念日我们正在吸收所有测定和应用程序的股票,用发光技术实现。看看我们的30年和Glo-ing庆祝活动了解有关我们今年庆祝发光测定和技术的更多信息。

继续阅读“哦,你可以”glo“的方式

设计报告构建体分析基因调控

生物发光记者测定是一个很棒的选择为了分析基因调节,因为与比色或荧光测定相比,它们提供更高的灵敏度,更宽的动态范围和更好的信号到背景比率。在典型的遗传报告器测定中,用含有报告基因上游克隆的感兴趣序列的载体转染细胞,并且报告活性用于确定靶序列如何影响实验条件下的基因表达。编码在相同或不同质粒上的第二个控制记者是必不可少的内部控制。次要记者用于标准化数据并补偿由细胞数量、裂解效率、细胞活力、转染效率、温度和测量时间的差异引起的变异。

报告基因测定策略的基本介绍

对于遗传报告者测定,使用具有弱促进剂的二次对照载体,如PGK或TK,以确保对照不会干扰您的主要报告载体的激活。在类似CMV或SV40的强促进剂控制下,将对照质粒的转染或将控制记者置换常常导致转录压缩或与实验启动子的其他干扰(即反式效应)。记者测定还可用于通过在报告基因的下游或3'中插入miRNA靶位点来定量评估microRNA活性。例如,Pmirglo双荧光素酶miRNA靶表达载体基于双荧光素酶技术,用萤火虫荧光素酶作为主要报告,以监测mRNA调节和Renilla荧光素酶作为对照报告的正常化。

在技​​术服务中,我们经常与刚刚开始项目的研究人员讨论,并寻找关于设计他们的遗传报告量的建议。他们有问题:

  • 向量中包含多少上游推动者区域?
  • 需要多少份响应元素副本来提供良好的反应?
  • 元素或周围序列的位置是否改变基因调节?
继续阅读“设计报告构建体以分析基因调节”

我有了荧光素酶载体,现在怎么办?

选择和优化转染方法

在技​​术服务中,我们经常与他们项目开始的研究人员讨论如何仔细设计并开始他们的实验。你有令人兴奋的时候选择了荧光素酶报告量矢量(S)这将最适合您的需求;你要制作发光细胞!但是,你如何选择将传染媒介的最佳方式进入您的细胞以表达记者?什么转染试剂/方法将最适合您的细胞类型和实验?你想做瞬态(短期)转染,还是你打算建立一个稳定的细胞系列?

继续阅读“我有我的荧光素酶矢量,现在是什么?”

有点或布雷特,哪个更好?

现在Promega正在扩展其在内源性蛋白表达水平上检查活细胞蛋白质相互作用或定量的选择,我们在技术服务中是关于哪个选择更好的问题。答案是,与许多测定一样......这取决于!首先让我们谈谈什么是什么NanoBiTNanoBRETTechnologies,然后我们将提供一些相似之处和差异,以帮助您选择最适合您个人需求的测定。继续阅读“有点或布雷特,哪个更好?”

你的蛋白质是什么?优化蛋白酶消化以获得内部勺子

是时候分析了蛋白质,并试图决定在哪里开始。你问问题如:我选择哪种蛋白酶?我在消化中使用多少酶?我应该摘要多久?

不幸的是,没有一定尺寸的拟合答案,而不是......“它取决于”。所有蛋白酶消化物将在变性蛋白质样品之间进行平衡,以允许进入裂解位点,优化蛋白酶的条件,以及与您的工作流程和下游应用的兼容性。我们提供适用于大多数样本的一般指导方针,但通常需要优化特定样本和应用程序的条件。

在这里,我使用胰蛋白酶消化下游质谱的例子来强调关键问题和因素,可以优化任何消化。继续阅读“你的蛋白质是什么?优化蛋白酶消化以获得内部勺子“

这个套件是否适用于我的样品类型?

无论您是使用细胞,组织还是血液,肯定都使用正确的测定系统对于成功至关重要。

在技​​术服务中,我们经常回答有关套件是否与特定类型的样本一起使用的问题。一个简单的方法,了解其他研究人员是否已经测试了您的样本类型的兴趣是搜索引文数据库,例如PUB Med.为试剂盒的名称和您特定的样品类型。我们也有一个可搜索的同行评审引文数据库在我们的网站上有专门引用我们产品使用的论文。在我们的很多产品页面上,你可以找到引用这些产品使用的论文列表。在技术服务方面,我们很高兴在此搜索中帮助您,并让您知道Promega的科学家是否测试了特定的应用程序或样本类型。这些信息为优化您自己的实验提供了一个很好的起点。

一个常见问题是“Caspase-glo®MaSays可以与组织匀浆一起使用?”虽然Promega尚未通过组织匀浆测试Caspase-glo®测定,但帕尔姆加以外的科学家们使用与组织匀浆的测定成功。与几乎所有的套件一样,在目录页面上提供资源,包括引文列表。举个例子,这是一个关于引文的链接为了Caspase-Glo®3/7测定系统.我们还有一个文章突出了检测小鼠肝脏胱天冬酶活性的引文.已经使用各种裂解缓冲液来制备本申请的组织匀浆。为了避免非特异性蛋白质降解,在裂解缓冲液中包含蛋白酶抑制剂鸡尾酒是有用的。使用蛋白酶抑制剂通常不会影响我们的测定化学品。另外,许多市售的蛋白酶抑制剂组可以使用不含胱天蛋白酶抑制剂。重要的是要考虑所用套件的特异性,并包括适当的对照,以确保荧光素酶反应按预期进行。有关引用和示例协议的更多信息,请随时在技​​术服务中联系我们我们可以帮助您启动您的样本类型。

如何选择正确的GOTAQ®产品以满足我对端点PCR的需求?

我们提供广泛的GoTaq®DNA聚合酶,缓冲液和主混合,所以我们经常回答关于哪种产品最适合研究人员的需求的问题。在Taq聚合酶页面,您可以通过单击页面左侧的类别来过滤产品以缩小搜索范围。以下是帮助您选择最适合PCR应用程序的匹配的指南。继续阅读“如何选择正确的Gotaq®产品以适应我对端点PCR的需求?”