监测运动员中的使用性能增强的物质是复杂的,用于测试和检测使用这类物质的检测要求在过去的几十年显著改变。
的血液学(血液)模块运动员生物护照由世界反兴奋剂机构2009年通过的12月1日,(ABP)。该模块规定了标准协议来监控通过查看生物参数的变化掺杂的专业运动员,而不依赖于检测体液中的非法的化合物。这样的生物方法消除了需要开发和验证了测试,以检测可被用于掺杂的每一个新的化合物。总部基地的当前版本,在2014年通过的,还增加了从尿液样本监测的某些类固醇的使用指标。
血液兴奋剂,其目的是增加红细胞使更多的氧可以被输送到肌肉耐力增加或性能是特别难以检测。通常有三种方法,它是完成的:使用促红细胞生成素(EPO)或合成的氧载体和输血。尽管可以检测到大体积的血液或使用EPO的输血,微剂量的EPO或输血聚集的红血细胞的较小体积是更难检测。
尼古拉斯·洛伊恩贝格在瑞士实验室兴奋剂分析有同事开发了一种方法以检测血液掺杂。除了解决血液兴奋剂的检测,他的实验室还担心放宽对样品的运输和存储需求,并确保样品采集不运动员的表现产生不利影响。
改善血液样本的采集和存储
由于样本采集和存储是准确的测试结果非常关键,任何新的试验发展到从易于收集和储存的检测血液兴奋剂的好处。该实验室洛伊恩贝格调查使用的TAP™按钮收集装置,它被誉为采血用简单的方法,易于使用,并消除了痛苦的针扎或手指刺会影响运动员表现的需要。TAP收集之后,从装置的血液20μL置于到滤纸上并干燥(干燥的血液样本; DBS),其是从多站点集合来存储和运输更容易实验室。
血液兴奋剂的RNA生物标记
血液抽取和自体输血或重组人EPO注射刺激红细胞生成和幼红细胞可以基于它们的基因表达图谱进行区分。一个由幼红细胞表达的基因是aminoleuvulinate合酶2中,编码的酶ALAS2参与血红素,RBC成熟期间的通路活性的合成的基因。RNA转录物是不稳定的并且倾向于迅速降解,因此,从所收集的样品中分离线性的RNA转录物是困难的。然而环状RNA(circRNAs)是一类由预的mRNA是高丰度,相当稳定和维持细胞类型特异性表达的backsplicing产生的RNA分子组成。所述洛伊恩贝格实验室开发了一种方法,用于测量的线性和环状的形式ALAS2DBS中的RNA监测红细胞生成。
在开发这一协议的最大挑战之一是实现高效RNA提取仅20ul干血液。Leuenberger和他的同事采用了两步净化;从苯酚开始:在DBS上提取氯仿,然后在the上进一步纯化Maxwell®RSC自动化仪器, 使用麦克斯韦RSC miRNA的血清和血浆包。从手动切换到用于第二步骤的自动化方法是至关重要的。它减少了污染的可能性,以及减少移液误差,而不损害良好的质量和因此的RNA有助于测定再现性产率。到血液光斑内正常化卷,协议使用RNA产生由管家基因。自动化验工作已经发表在生物分析法。
下一步是什么
该协议被测试,以查看是否EPO或小输血微剂量也可通过在DBS监测ALAS2 RNA表达进行检测。兴奋剂分析的瑞士实验室还是开发的方法通过从全血样品中分离质粒DNA,以检测基因兴奋剂的过程中,使用麦克斯韦RSC。
此外,所使用的收集和储存方法对临床,特别是对需要进行常规血液监测的患者有影响。分离环状rna的能力显示出潜力法医学应用识别体液。