细胞游离表达:非放射性检测/应用

Transcend™非放射性转换检测系统允许使用无细胞表达合成的蛋白质的非酰化检测。使用这些系统,在翻译期间将生物素化的赖氨酸残基掺入新生蛋白中,将该生物素化的赖氨酸加入到翻译反应中,作为预充电的ε-标记的生物素化的赖氨酸-TRNA复合物而不是游离氨基酸。在SDS-PAGE和电子印度之后,通过结合链霉抗生物素蛋白 - 碱性磷酸酶(链霉抗生物素蛋白-AP)或链霉抗生物素蛋白 - 辣根过氧化物酶(链霉抗生物素蛋白-HRP),可以通过比色或化学发光检测进行可视化。通常,这些方法可以在凝胶电泳后3-4小时内检测0.5-5ng,可用于各种蛋白质组学相关应用。例子包括:

Kumeta,Y.和Ito,M.(1998)来自培养细胞的δ-屈糖合酶的表征Aquilaria.,负责在agarwood中形成癫痫赛植物生理学154,1998-2007Δ-guaiene是其中一种化合物,发现了树脂部分Aquilaria.植物。为表达关瓜肾合成酶的克隆创建并筛选cDNA文库。发现三个克隆并使用基于细胞和无细胞的表达进一步表征。在这种情况下,在TNT系统中产生并表达,用Transcend TM TRNA标记。确定每种克隆的表达蛋白质和相关酶活性的相对表达水平。

Vega-Sanchez,M.。(2008)Spin1,AK同源结构域蛋白负受调节,由E3泛素连接酶SPL11引起,参与水稻中的开花时间控制。植物细胞20.,1456-69。SPL11是涉及植物开花调节的关键蛋白质。使用酵母两种杂交系统筛选水稻cDNA文库,以确定蛋白质与SPL11相互作用。这些实验表明,SPL11与旋转杂交相互作用。为了表征相互作用,使用TNT系统表示旋转,标有Transcend™TRNA,与GST-MARDOWN结合使用

天啊,H.。(2010)后期促进复合物/环体激活剂Cdh1通过靶向p190 RhoGAP来调节Rho GTPase的降解。Mol.Cell Biol.30., 3994 - 4005。Cdh1是后期促进复合物/环小体的共激活因子之一,作为E3泛素连接酶,用于细胞周期从后期到G1期结束的各种细胞周期蛋白。其他数据表明,Cdh1在细胞周期以外的过程中也有活性,如调节细胞形状。通过在Transcend™tRNA标记的TNT系统中表达p190,并包含泛素化所需的成分,Cdh1确定p190为降解目标。

Marchive,C.。(2007)葡萄转录因子VvWRKY1的分离、鉴定及其对转基因烟草植株真菌病原反应的影响J.实验植物学58,1999-2010。在植物中,许多Wrky蛋白涉及植物防御的调节,以通过细菌如植物病变。假设这类转录因子与W字幕结合,是SAR基因启动子中含有的常见启动子元素。确定培养葡萄园是否是这种情况。从a中分离出全长的vvwrky1 cDNA葡萄葡萄图书馆。为了检测VvWRKY1蛋白- w -box DNA相互作用,我们进行了电泳迁移率测定(EMSAs)。VvWRKY1通过TNT表达,用Transcend™tRNA标记,并与三种寡核苷酸探针孵育,这三种寡核苷酸探针在其他植物物种中被证明与WRKY蛋白结合。

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加里水

战略营销经理Promega公司
加里赢得了他的B.。在1982年的UW-Madison中,1982年至1986年,他在UW-MOMISON担任研究科技。从1986年到目前的加里一直在帕尔梅斯公司为许多能力提供服务,包括作为Promega笔记的第一个编辑。他还是经理技术服务和培训,产品经理限制/改性酶,产品经理蛋白质分析,现在是营销经理蛋白质分析。bob体育电竞app

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