成功的细胞分析的考虑II:细胞培养条件

这是在一系列博客文章涉及的主题来考虑设计和执行基于细胞的检测时的第二位。在第一部分中,我们讨论的重要性选择合适的细胞类型为您分析。在这里我们将讨论细胞培养条件如何影响检测结果。

细胞一致,谨慎处理是可靠的,可重复的结果至关重要。

你的细胞培养基可能是细胞培养最基本的组成部分。你使用的培养基应该是新鲜的和一致的(来自同一厂家)。因为血清补充剂是复杂的生物解决方案,他们从供应商而有所不同,甚至不同批次来自同一供应商。一定要注意,所有血清补充的很多,来源,用于培养用于任何实验细胞的培养基。这将帮助你在后面重复实验,如果您需要在未来解决可能是重要的。

时一定要小心处理您的细胞;避免粗糙的移液。当你在移植物细胞时,确保悬浮生长的细胞保持悬浮状态。当你使胰蛋白酶化贴壁细胞,不超过胰蛋白酶化:你可以杀死你的细胞。但是,如果你的胰蛋白酶是不是有效的,你将最终获得的细胞团块。一个很好的忠告是要找到谁的人有经验的工作与你所使用的细胞类型。花一些时间与这个人,学习一些“艺术”培养那些特定细胞中成功的。当你的细胞计数,可以考虑使用台盼蓝染料除了血球,这样就可以制版活细胞的正确数目。

污染由微生物和其他细胞系的细胞培养的是在细胞培养实验室的主要问题。为了避免由微生物如支原体培养物的污染,优良的无菌技术是绝对必要的。如果你从来没有维持细胞培养物之前,找到各地最好的信誉,为洁净细胞培养技术人员,并从该人学习。

细胞系的身份已被确定为在许多研究出版物一个问题,为具有被错误识别或交叉污染的另一细胞系(1)中使用的细胞有多达15-20%已发表的研究。大多数细胞系库,许多杂志和授予组织现在需要的遗传证据表明,在研究中使用的细胞是什么作者声称。这种细胞系认证使用STR谱(1,2)通常实现。

随着......的数量的......细胞系通道增加时,细胞可能会改变性质,特别是当细胞到达汇合时,你开始看到接触抑制信号。你的分析结果可能反映了这种变化。转染细胞时汇合度也是一个重要的参数,如果转染是实验过程的一部分,则需要考虑细胞密度和汇合度。一个建议是创建一个低通道数的散装库存,然后为每个实验解冻一个新的小瓶,这样每个实验的通道数都是相同的。

细胞密度也会影响化验结果。你需要考虑的是,你的播种密度和实验时的密度可能不一样。例如,你是将细胞分散到检测板孔中并立即开始检测,还是在治疗或检测前将细胞培养一段时间?

细胞密度会影响剂量反应曲线。在这里,我们进行的三次剂量响应曲线在三种不同的密度接种HepG2细胞他莫昔芬。将HepG2细胞在1000,10,000或35,000个细胞在96孔板中每孔,并暴露于他莫昔芬4小时各种浓度的。胱天蛋白酶3/7活性使用发光胱天蛋白酶3/7Glo®底测定测量,并且结果表示为对于每个细胞密度最大信号的百分比。所有数据点代表平均值±标准差(n = 3)。从授权转载里斯,T和莫拉维克,R.(2004)试验药物开发。技术。2,51。

剂量反应曲线,细胞实验
显示不同细胞密度影响的剂量响应曲线。

注意,在较低的密度接种细胞更敏感;更密集的培养物可赋予一个“保护性”的效果。因为这里的峰活性后具有较低浓度的他莫昔芬所见,更长的曝光是必要使用较高密度培养时看到的效果。此外,杂草丛生培养物将不得不因为可能不进行相关处理的化合物的效果老化培养物相关的细胞死亡和毒性较高的背景。

细胞化验也有一个最佳射程细胞的数量线性结果。所以,当你建立一个新的实验系统时,一点点的初步工作就能确保你的实验得到可靠的结果。使用连续稀释的细胞进行对照试验将帮助您确定试验的敏感性和范围。它还将为决定播种密度,以及在电镀、处理和测定之间的时间间隔提供指导。对于多路分析或活/死分析,您将希望并行执行两个对照分析,一个处理细胞和一个未处理细胞。

这是几个用于细胞培养和能够影响基于细胞的测定结果的电镀条件的考虑。在接下来的文章中,我们将讨论治疗参数。

参考文献

  1. 邓纳姆,J.H.和Guthmiller,P.(2008)做好科学:验证细胞系的身份。细胞注22,15-17。http://www.promega.com/resources/articles/pubhub/cellnotes/doing-good-science-authenticating-cell-line-identity/
  2. Oostdik,K.,彼得森,A.,Schagat,T和Storts,D.干细胞系认证和污染物检测。[互联网] 2009年[引用:2012年,01,06]。可从以下http://www.promega.com/resources/articles/pubhub/enotes/stem-cell-line-authentication-and-contamination-detection/

资源
花瓣(Promega Europe培训和应用实验室)课程:
从细胞培养到细胞分析
细胞培养理论与实践
多媒体:
细胞培养物的制备和电镀

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米歇尔Arduengo

社交媒体经理Promega公司
米歇尔在哈佛大学获得生物学学士学位卫斯理学院梅肯,GA,她通过BCDB计划在博士埃默里大学在亚特兰大,佐治亚州。Michele是Promega的社交媒体经理,也是Promega Connections博客的执行编辑。bob体育电竞appbob体育app二维码她喜欢沉浸在一本好书中,吹小号,织毛衣,穿雪鞋。

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