如何降低细胞培养变异

方案1:杰克需要MCF-7细胞的烧瓶的分析,所以他将电子邮件发送到研究生群发功能要求的细胞。梅丽莎回答说她有细胞的一个额外的烧瓶,她可以分享。杰克愉快地接受了细胞,并开​​始他的实验。

方案2:迈克尔昨天他的传代细胞,根据协议,本来板块今日细胞治疗。然而,他以前的实验被推迟,因此他决定它们板块,而不是明天。细胞看起来很健康,所以应该没问题。

有什么不对上述情况?这些行动似乎无害的,但他们可能是变异的原因,导致了不可复制的结果。

不可复制的结果是一个大问题,尤其是在临床研究。在2011年尝试了研究,在肿瘤学领域发表的再现范围的临床前数据,发现只有20%-25%的研究可以被复制(1)。另一项研究试图验证53小说“里程碑式”的研究,包括新的方法,以目标癌症研究结果。只有6(11%)从53项研究的是可再现的(2)。由于无法重现公布的数据对药物发现的不利影响。时间,精力和金钱,当早期的基于细胞的分析不能重复往往是浪费了。其中不可再现的许多贡献者,变异的细胞培养可能是最突出的。

那么,什么是细胞培养的变化,以及我们如何能降低它的原因是什么?在全球Promega公司战略营销经理特里·里斯,有一些很好的建议。在他2017年的谈话提出了在分析指导手册研讨会(由美国国立卫生研究院赞助),特里解释了细胞培养物的性质和经过多次传代他们的潜力,表型“漂移”。发生这种漂移,因为细胞的任何生长优势会随着时间的推移占主导地位,导致细胞群的变化。方法来限制这种漂移包括限制通道的数量和标准化的细胞培养条件和处理程序。忽略了处理程序的小细节可能导致细胞群中意外更改。例如,不完整的胰蛋白酶实际上可能导致选择了松散的贴壁细胞。

以下是特里在建立细胞培养的标准作业程序,可以帮助减少可变性的一些其他技巧:

获得细胞来自可靠来源

有研究表明,细胞系18-36%已经发生误认,所以不要以为你的细胞是什么,你认为他们是。从实验室获得细胞的隔壁不推荐(对不起,杰克!)相反,请确保您获得来自可靠来源的细胞进行细胞系的认证,如美国典型培养物保藏中心(ATCC)。另一种方法是每次收到一个新的细胞系的时间来验证您的细胞系。许多学术设施和商业供应商,如ATCC,提供细胞系的认证服务。了解更多关于在特里的谈话细胞系的身份验证(见下文),并在分析指导手册

执行污染的常规检测

细菌和酵母是常见的污染物,尤其是在无抗生素的介质,和相对容易检测。支原体,但是,却难以发现,可能很长一段时间被忽视了,导致影响实验结果细胞的变化。因此,要进行例行的检测是非常重要的。

使用一致的培养条件

任何一种在培养条件变化的潜在影响的结果。例如,在测定中使用时,细胞在库存烧瓶中的密度会影响细胞的响应性。另一个变化是检测从最后一段时间。这是因为在介质,如葡萄糖和谷氨酰胺的能源,逐渐被同时产生乳酸盐和谷氨酸盐,导致pH水平变化耗尽。为了减少可变性,从通道细胞密度和时间应该是每一个实验是一致的。(对不起,迈克尔!)

使用冻存细胞的细胞筛选

一个很好的方法,以减少细胞筛选变异是使用解冻和使用的冷冻库存的方法。这涉及冻结了一大批“股票”的细胞,然后进行质量控制测试,以确保他们适当地对治疗的反应。然后,当你需要执行检验,刚刚解冻细胞的另一个小瓶从该批次开始你的分析,就像一个检测试剂!这种方法消除了需要你的细胞成长为一个特定的阶段,这可能需要数天,并推出更多的可变性。

控制细胞数量的变化

手机号码经常在实验过程中,由于细胞增殖或死亡而改变。所以,当你的药物治疗后,看到在总报告基因水平的降低,是不是因为基因表达下降还是因为你的细胞正在死亡?这个问题可以很容易地通过复用实验来回答实时分析这一措施活的或死的细胞在同一试验孔。

要了解更多关于细胞培养和细胞系认证标准作业程序,查看有关特里的完整演示分析指导手册研讨会网页(选择“特里里斯”的演讲场)。

参考文献:

  1. 普林茨,F.等。(2011年)信不信由你:多少我们可以依赖于潜在的药物靶点公布的数据?自然评论药物发现。10,712
  2. 贝格利,C.G.,和埃利斯,L.M。(2012)药物开发:提高标准的临床前研究性质。283,531-533

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约翰娜是Promega的科学作家。她赢得了她在生物医学科学博士在贝勒医学院。她是加入Promega公司五年前一名自由撰稿人和全职妈妈。约翰娜是来自台湾,她认为台湾菜是世界上最好的。她喜欢做瑜珈,旅游,花时间与她的两个孩子。

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