回顾:无细胞表达系统帮助描述了参与缺氧反应的蛋白质

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一个HIF-1α-VHL蛋白-ElonginB-ElonginC复杂的结构

威廉·G·凯林小,彼得·拉特克利夫爵士和格雷格L. Semenza的被授予了2019年诺贝尔生理或医学他们的细胞如何感知和适应氧气供应发现。

凯林和拉特克利夫的实验室集中讨论了转录因子HIF(缺氧诱导因子)的努力。这个转录因子在细胞适应关键的对氧气供应的变化。

当氧含量升高时,细胞中含有的HIF非常少。泛素通过VHL复合物添加到HIF蛋白中,并在蛋白酶体中降解。当氧含量低(缺氧)时,HIF的数量增加。

在2001年这两个群体发表的文章表征VHL和HIF之间的相互作用,以及这些文章是由诺贝尔奖组织中引用它们的新闻稿今年的奖项。(1,2)。这两项研究都表明,脯氨酸的正常氧条件下的羟基化残基P564启用VHL识别和结合到HIF。

使用细胞自由表达(即,TNT耦合转录/翻译系统)由两个实验室是在VHL的表征键:HIF相互作用的实验室使用HIF和VHL35-S下正常或处于缺氧工作站经由TNT系统产生的标记的蛋白质:

  • 确定的氯化亚铁和氯化钴的相互作用的影响
  • 映射到发生所需的相互作用HIF的特定区域(556-574)
  • 确定HIF点突变对相互作用的影响
  • 使用合成肽阻断相互作用
  • 结论是哺乳动物细胞中的一个因子是相互作用发生的必要条件。

参考文献

  1. 伊万,男。(2001)HIF靶向vhl介导的脯氨酸羟化破坏:对O的影响2传感科学292: 464 - 67。
  2. Jaakkola, P。等。(2001年)HIF-α的靶向的复杂的希佩尔 - 林道泛素化被O2- 脯氨酰监管羟化科学202,468-72。

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加里KOBS

战略营销经理Promega公司
加里获得了学士学位在细菌学,威斯康星大学麦迪逊分校于1982年从1982- 1986年,他曾担任研究技术在威斯康星大学麦迪逊分校。从1986年到本加利已与Promega公司在许多能力,包括为Promega公司债券的第一个编辑服务。他还管理技术服务和培训,产品经理限制/修饰酶,产品经理蛋白质分析,现在市场部经理蛋白质分析。bob体育电竞app

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