回顾:无细胞表达系统帮助描述了参与缺氧反应的蛋白质

HIF-1a-pVHL-ElonginB-ElonginC复合体的结构
HIF-1a-pVHL-ElonginB-ElonginC复合体的结构

威廉·g·凯林,彼得·j·拉特克利夫爵士和格雷戈·l·赛门扎被授予诺贝尔奖2019年诺贝尔生理学或医学奖表彰他们对细胞如何感知和适应氧气供应的发现。

Kaelin和Ratcliffe的实验室致力于研究转录因子HIF(低氧诱导因子)。这一转录因子是关键的细胞适应变化的氧气供应。

当氧含量升高时,细胞中含有的HIF非常少。泛素通过VHL复合物添加到HIF蛋白中,并在蛋白酶体中降解。当氧含量低(缺氧)时,HIF的数量增加。

2001年,这两个研究小组发表了描述VHL和HIF之间相互作用的文章,这些文章被诺贝尔奖组织在他们的文章中引用新闻稿关于今年的奖项。(1、2)。两项研究均表明,在正常氧条件下脯氨酸残基P564的羟基化使VHL能够识别并结合HIF。

使用细胞自由表达(即,TNT耦合转录/翻译系统),这两个实验室在表征VHL:HIF相互作用方面都发挥了关键作用35由TNT系统在正常或低氧工作状态下产生的-S标记蛋白:

  • 测定氯化亚铁和氯化钴对相互作用的影响
  • 绘制HIF发生相互作用所需的特定区域(556-574)
  • 确定HIF点突变对相互作用的影响
  • 使用合成肽阻止的相互作用
  • 结论是哺乳动物细胞中的一个因子是相互作用发生的必要条件。

文献引用

  1. 伊凡,M。(2001)低氧诱导因子靶向vhl介导的脯氨酸羟化破坏:对O的影响2传感科学292: 464 - 67。
  2. Jaakkola, P。et al。(2001)靶向HIF-定向于复合物的von Hippel-Lindau泛素化2-调节的丙基羟基化作用科学202, 468 - 72。

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