Xpressamp™直接放大:简化和加速时间qpcr结果

随着SARS-COV-2大流行继续在美国和全球各地的愤怒中愤怒,对Covid-19测试的需求正在增加。绝大多数Covid-19测定使用RT-QPCR检测患者样品中的病毒RNA,例如鼻咽拭子,其被收集并储存在病毒或通用式运输介质(VTM / UTM)中。这些Covid-19测定的一般工作流程可以如下所述:

  1. 收集并储存患者样品
  2. 船舶样品到测试实验室
  3. 从样品中提取RNA
  4. 放大和分析样品

虽然许多制造这些步骤中使用的产品的公司已经能够适应和显着提高其生产能力,但这些产品的供应与全球测试需求仍然存在差距。样品收集和储存步骤和RNA提取/纯化步骤都具有瓶颈和经验提供限制的趋势。解决这些瓶颈的一种方法和扩大这些需求产品的生产能力是评估在工作流程中跳过步骤的可行性,而不会阻碍检测来自样品的病毒RNA的能力。

虽然我们在Promega制造和供应RNA提取产品,但我们将RNA提取作为当前Covid-19测试工作流程中的特别限制步骤。利用我们在样品制备和样品放大方面的40多年的经验,特别是我们与挑战样品如法证犯罪现场证据,我们寻求一种解决方案,该解决方案将允许在VTM / UTM中储存的鼻咽拭子分析,而无需首先进行RNA提取。结果是一种直接的PCR扩增方法,简化并加速了QPCR结果的时间。

如名称所暗示的,直接PCR是一种能够直接PCR扩增样品的方法,而无需现有的RNA或DNA提取和纯化步骤。通过删除那些更耗时的步骤,您可以更快地完成上游进程,使您能够更快地继续下游处理。

直接放大挑战

直接PCR扩增具有自己的一系列挑战。与任何PCR测定一样,PCR抑制总是考虑的一个因素。PCR抑制剂 - 来自样品和用于溶解和释放RNA的裂解缓冲液 - 具有QPCR中偏离定量的可能性。在典型的PCR工作流程中,对PCR抑制的溶液是纯化或稀释RNA提取物,这导致RNA的损失。由于直接扩增跳过纯化步骤,因此对潜在的方式有助于分子抑制机制有助于克服您在PCR抑制剂存在下可能经历的任何分析限制。

在直接PCR扩增中克服的第二种主要挑战是测定敏感性。在分析之前,RNA萃取可以用作浓缩步骤,通常以XμlVTM开始,并在Yμl中洗脱 - 导致样品浓度的Z倍增加增加进入RT-QPCR测定。在直接扩增中,没有样品浓度。事实上,您通常会在裂解步骤期间稀释样品以释放RNA。为了克服这一点,许多需要重新优化PCR测定,因为可以不针对直接从样本扩增进行优化的PCR测定来进行优化的PCR测定。

直接扩增的好处

尽管有挑战,但直接PCR扩增存在许多益处。在典型的PCR工作流程中,提取和纯化洗涤步骤利用许多缓冲剂和优化试剂。在直接放大工作流程中,您能够规避这些昂贵和限速的步骤,使您能够避免试剂供应限制的潜在吞吐量限制,并使您能够降低成本并保护珍贵的样品材料。

利用直接PCR工作流程,另外有助于节省实验室的时间,尽管节省的时间量将根据您的先前的RNA提取方法是否自动化或手动而变化。直接放大工作流程也是自动化的,不需要对专门设计的塑料耗材等依赖性。

我们的解决方案:Xpressamp™直接扩增试剂

Xpressamp™直接扩增试剂提供了一种快速的RNA提取的方法,以制备用于PCR基扩增的病毒样品。通过鼻咽拭子或在通用或病毒转运培养基中收集样品,使用RT-QPCR进行直接扩增分析。简单的样品制备方法只需要10分钟,室温孵育,易于自动化,以实现高通量需求。

新!来自唾液中病毒RNA的直接扩增的方案。下载PDF协议。

检测病毒RNA,无需RNA提取

病毒转运培养基(VTM)用鼻咽拭子接种,并用RSV A和流感B(香港)病毒掺杂,从螺旋Elite™灭活标准,灭活的流感A / B和呼吸合胞病毒重构。这种高级病毒样品(1×103.拷贝/μl)在VTM中1:10和1:100稀释,以产生培养基和低水平的病毒样品。并行地,两个用户使用Xpressamp TM直接扩增试剂从尖刺的VTM样品中创建样品裂解物。然后,通过RT-QPCR使用GOTAQ®探针1-STEM RT-QPCR系统(CAT.#A6121)介绍Xpressamp™解决方案的QPCR检测到RSV A和流感B的存在。n = 6个放大重复。

简单,自动化友好协议

可定制

Xpressamp™直接扩增试剂可以以许多方式调整以满足您的特定需求。您可以使用许多定制选项,从批量购买试剂,以改变分配规模或重新格式化和重新标记。

了解更多信息Xpressamp™直接扩增试剂和能力自定义满足您的需求

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娜塔莉是Promega的一位科学作家。她赢得了她的B.。从威斯康星州 - 麦迪逊大学的微生物学中,她的康涅狄格州科学学位。在她的业余时间,她可以找到打排球,制作音乐,在她永无止境的工艺品项目中砍伐,与动物志愿者。

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